★☆★Добро пожаловать на сайт химической технологии и органического синтеза!★☆★
Каталог статей
Меню сайта

Поиск

Категории раздела
Мои статьи [18]
Описание различных опытов
Химическая технология [12]
Основы и азы по химической технологии

Наш опрос
Оцените мой сайт

[ Результаты · Архив опросов ]

Всего ответов: 268

Статистика


Приветствую Вас, Гость · RSS 29 Мар 2024, 15:28:03

Главная » Статьи » Мои статьи

Хроматография колонны.Изоляция β-каротина.
1. Приготовление исследуемого вещества.

Около 20 грамм размороженного шпината растворяют в 25 мл этилового спирта. Хорошо перемешивают стеклянной палкой, чтобы разбить всю мякоть. Отделяют полученный раствор от мякоти с помощью обычной стеклянной воронки. В нижней части воронки должен быть комок ваты, который препятствует попаданию мякоти в отделяемый раствор. Мякоть высушивают с помощью сушильной бумаги. После высушивания, мякоть растворяют в 20 мл дихлорметана и хорошо перемешивают. Раствор отделяют в колбу объёмом 50 мл и испаряют в эвапораторе.
В полученный продукт добавляют 10 капель петролейного эфира и 10 капель дихлорметана. Колбу необходимо полностью завернуть в алюминиевую бумагу, чтобы свет не разложил продукты.

2. Приготовление разделяющей колонны.


Всю работу следует делать в вытяжном шкафу!

Низ колонны затыкают комком ваты и насыпают поверх чистый песок, около 0.5 см высотой. Песок используется как основание для будущей твердой фазы. В химический стакан объёмом 250 мл насыпают порошка оксида алюминия (
Al2O3) высотой около 75 мл по шкале стакана и добавляют 40 мл петролейного эфира.
Хорошо перемешав, переливают кашицу в колонну, стараясь чтоб не было пузырьков воздуха. Если не выходит перелить всю кашицу с первого раза, пропускайте жидкость через колонну в стакан с Al2O3 и, разбавляя, снова переливайте в колонну пока не получится твердая фаза высотой в 15 см. Сверху твёрдой фазу насыпают песок высотой в 0.5 см чтобы сохранять постоянную "влажность" твёрдой фазы.
 


3. Разделение продуктов.

С помощью стеклянной пипетки перемещают, подготовленный заранее раствор с продуктами. Кроме того, оставляют несколько капель для проверки тонкослойной хроматографии. Весь элюент (раствор) с образцами прошедший колонну собирают в отдельные пробирки. Первый элюент объёмом в 200 мл состоит из 95% объёма петролейного эфира и 5% объёма этил ацетата. Им промывают колонну до тех пор, пока не выходит весь оранжевый слой β - каротина. С 3-ей по 6-ую пробирку элюент был окрашен в слабо желтый цвет. Остатки β-каротина промывают элюентом в 50% объёма петролейного эфира и 50% объёма этил ацетата. Начиная, с 7-ой по 9-ую пробирки промывают колонну элюентом, состав которого 90% объёма этил ацетата и 10% объёма метилового спирта. Метанол лучше впитывается, чем этил ацетат, и таким образом вымывается зелёный слой хлорофилла. В конце колонну можно промыть чистым этил ацетатом, чтобы вымыть оставшийся хлорофилл. Собранные фракции с β-каротином и хлорофиллом переливают в отдельные колбы и испаряют в эвапораторе элюент.
 
4. Проверка тонкослойной хроматографии.

Вырезают прямоугольник из тонкослойной хроматографии величиной в 5Х2.5 см и обозначают карандашом на нем нижнюю и верхнюю границы. также обозначат три точки - неразделённый образец, отделённые образцы хлорофилла и β-каротина. Каждый образец добавляют с помощью отдельной капилляры. Готовят элюент состав, которого 80% объёма петролейного эфира и 20% объёма этил ацетата. Переливают в небольшой химический стакан высотой в 3 мм и кладут туда же тонкослойную хроматографию с образцами, прикрывая чашечкой Петри. Ждут, пока элюент поднимется до обозначенной верхней границы и вытаскивают, чтобы испарился впитавшийся раствор. После получения соответствующих различимых глазом точек рассчитывают Rf.



Спектр УФ: β-каротин (447, 474 нм), хлорофилл (410, 432, 662 нм).

Лит-ра: Pavia, 3rd ed, p.593-629
Категория: Мои статьи | Добавил: C2H5OH (03 Июл 2011)
Просмотров: 2308 | Теги: бета-каротин, колонна, хлорофилл, элюент, хроматография, алюмина | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]
Форма входа


Наши баннеры
Вид баннера на сайт:

Химическая технология и органический синтез


Код баннера на сайт:


Вид баннера на чат:

Общение для всех


Код баннера на чат:


Поделиться

Доска объявлений

Друзья сайта

Посетители
Новички
natkukhtina2124477
0897034112vlad)))))

Последние посетители


Copyright MyCorp © 2024
Хостинг от uCoz